21.4 SEMEN SEXADO
En contraste con el procesamiento de semen convencional que tiene puntos de intervención mínimos (alrededor de tres o cuatro dependiendo del método), el procesamiento de semen sexado implica más de 20 pasos antes de que sea sometido a criopreservación. Esencialmente, la diferencia en el contenido de ADN entre espermatozoides X o Y sigue siendo la principal y única característica de discriminación para separarlos. En especies de interés zootécnico, la diferencia en el rango de contenido de ADN es de 3.6% en cerdos a aproximadamente 4.4% en bovinos. En promedio, la diferencia de tamaño entre los espermatozoides X y Y es de aproximadamente 4%.
El procedimiento de sexado se basa en la difusión de la tinción con Hoechst 33342 a través de la membrana celular intacta, que se une selectivamente a los pares de bases A/T dentro del surco menor del ADN de doble cadena. La absorción y los espectros de emisión de fluorescencia son de aproximadamente 350/460 nm y este cambio lo convierte en un marcador muy conveniente para determinar la cantidad precisa de ADN en la célula espermática.
El proceso de citometría de flujo después cuantifica la diferencia de ADN entre los dos tipos de esperma utilizando dos detectores de fluorescencia que miden la intensidad de la señal del H33342 unido al ADN cuando es activado por un láser. El citómetro consiste en un circuito cerrado de alta velocidad de flujo que permite alinear y leer los espermatozoides individualmente suspendidos en microgotas de aire en chorro lo que permite al espermatozoide fluir en una sola línea creando una carga en las gotas diferentes para separar las dos poblaciones de esperma. La presencia de placas cargadas en el punto de descarga permite que las dos poblaciones separadas sean desviadas en corrientes opuestas para la recolección. Las poblaciones separadas se distinguen por histogramas de fluorescencia en el citómetro de flujo, el software también permite desechar el esperma moribundo o muerto. La posibilidad de obtener poblaciones separadas permite la recolección de cantidades altas de espermatozoides X y/o Y (video 2).
El reto en muchas maneras ha sido minimizar el efecto de las múltiples etapas por las que los espermatozoides tienen que pasar durante el proceso de clasificación antes de que finalmente se congelen y se almacenen para la inseminación artificial. La tecnología XY como se describió en publicaciones anteriores ha sido modificada y ahora cambiada a la nueva tecnología SexedULTRA™ (Navasota, TX, EE. UU.). Básicamente, esto ha sido una renovación completa de todos los medios utilizados para el proceso desde el mantenimiento inicial y preparación de los espermatozoides para la tinción, el fluido en las fundas y la posterior recolección y congelación.
Con el paso de los años, quienes trabajan en centros de producción de semen han utilizado una herramienta bastante contundente para combatir la subfertilidad en el ganado. El principal método ha sido simplemente aumentar la concentración espermática por dosis de inseminación para resolver los posibles efectos adversos en la fertilidad de los espermatozoides que presenten algún daño. La fertilidad relativa del semen sexado en concentraciones de 2.1 millones y 10 millones de espermatozoides era alrededor del 70% del semen convencional.
