23.9 CRIOPRESERVACIÓN DE EMBRIONES IN VITRO
La criopreservación de embriones producidos in vitro ha representado un gran cuello de botella en la aplicación de esta biotecnología, pues los embriones producidos in vitro son más susceptibles al proceso y por lo tanto los resultados de preñez son generalmente inferiores cuando se transfieren este tipo de embriones. Es así que la viabilidad de los embriones luego del congelado es afectada por las condiciones de cultivos.
Sin embargo, existen metodologías que permiten la criopreservación de embriones cultivados in vitro; estas incluyen congelado lento convencional y vitrificación. Ambos consisten básicamente en cuatro pasos: suspensión de los embriones en una solución que tiene un crioprotector; enfriamiento que evite la formación de cristales intracelulares durante el congelamiento; descongelado a temperatura fisiológica para recuperar la funcionalidad, y la remoción del crioprotector (video 4).
23.9.1 CONGELADO CONVENCIONAL
También conocido como congelamiento lento y se caracteriza por utilizar concentraciones bajas de crioprotectores como glicerol y etilenglicol. El principio de esta técnica es reemplazar lentamente el agua intracelular con el crioprotector para minimizar la formación de cristales. En el caso del glicerol se utiliza generalmente con azúcares, como sacarosa o arabinogalactano para aumentar la presión osmótica extracelular y ayudar a disminuir el volumen acuoso intracelular. El procedimiento realizado es igual al descrito en la congelación de embriones in vivo. Cuando los embriones se congelan con este método, la transferencia de embriones es directa. Eso significa, que la pajuela que contiene al embrión se descongela a baño maría y se transfiere a una hembra receptora, sin necesidad de bajar al embrión de la pajuela para lavarlo. Esta ventaja ocurre gracias a la gran permeabilidad que tiene la membrana celular al etilenglicol, lo que resulta en un pasaje balanceado sin shock osmótico.
23.9.2 VITRIFICACIÓN
Se caracteriza por usar concentraciones altas de crioprotectores y disminución rápida de la temperatura a -196°C. Los crioprotectores generalmente utilizados son Dimethyl Sulfoxide (DMSO), polietilenglicol y a veces glicerol. A través de esta técnica se logra congelar las células embrionarias sin la formación de cristales, preservando así la arquitectura intracelular y de las membranas.
