Universidad Nacional Autónoma de México
Reproducción de los animales domésticos
Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia
Capítulo 18. Caninos

18.2 CARACTERÍSTICAS DEL CICLO ESTRAL

18.2.1 CITOLOGíA VAGINAL EXFOLIATIVA

La citología vaginal exfoliativa (CVE) es una técnica de gran valor en el manejo reproductivo de los caninos, permite identificar las fases del ciclo estral de la perra al detectar los cambios que ocurren en el epitelio vaginal durante cada una de ellas. La CVE, en conjunto con otras pruebas, como la medición de LH y progesterona (P4), permite determinar el momento en que ocurre la ovulación y, por ende, el inicio del momento óptimo para que la hembra pueda ser fertilizada. Funciona también como auxiliar en la detección de diversas afecciones reproductivas, entre las que se encuentran vaginitis, infertilidad, tumor venéreo transmisible (TVT), tumores vaginales, metritis y piometra.

El fundamento de la CVE es la observación de los cambios morfológicos del epitelio vaginal (figura 5), el cual se engrosa y descama, producto de la acción de los estrógenos. Durante la fase inicial del ciclo, las células epiteliales se encuentran en contacto con la irrigación sanguínea y conforme aumentan los niveles de estrógenos el epitelio vaginal se va engrosando, ocasionando que la célula epitelial se aleje del aporte sanguíneo, modificando sus características.

Figura 5. CVE con presencia de células parabasales (A) e intermedias (B).

Las células del epitelio vaginal se clasifican en: parabasales, intermedias, superficiales y anucleadas. Además, se pueden observar leucocitos, eritrocitos, bacterias y neutrófilos intracitoplasmáticos dependiendo de la etapa de ciclo estral.

El material para llevar a cabo una CVE es de fácil adquisición y de bajo costo. La muestra se debe obtener de la porción más profunda posible de la vagina, utilizando un hisopo de plástico flexible estéril de 15 cm de largo, y realizar un frotis. Es una técnica relativamente sencilla (figura 6), sin embargo, debe realizarse con limpieza y cuidado para no introducir agentes patógenos o lastimar a la perra.

Figura 6. Limpieza de los labios vulvares con algodón o gasa húmeda para retirar cualquier suciedad y evitar que sea arrastrada hacia el vestíbulo vaginal con la introducción del hisopo, debe hacerse énfasis en la comisura dorsal de la vulva.
Figura 6. Para introducir el hisopo, de recomienda exponer la vulva con el dedo índice, mientras que con los dedos pulgar y medio se separan ligeramente los labios vulvares.
Figura 6. Hisopo usado para la citología vaginal.
Figura 6. El hisopo se introduce por la parte dorsal de la vulva en un ángulo de 90° hasta topar con el cingulum; se debe tener precaución de no introducirlo en el meato urinario o a la fosa del clítoris.
Figura 6. En este punto el hisopo se direcciona de manera horizontal para alcanzar la vagina, aquí se toma la muestra tratando de exfoliar la mayor cantidad de células.
Figura 6. Una vez obtenida la muestra, se realizan tres líneas celulares rodando el hisopo sobre una laminilla.

El proceso de tinción consta de 3 pasos de 15 segundos cada uno (figura 7):

  1. Fijación en alcohol al 70% o metanol. Secado al aire.
  2. Introducción en la preparación eosina amortiguada (color rosa-naranja). Retirar el excedente por escurrimiento.
  3. Inmersión en la preparación de policromo amortiguado (color azul –morado).

Figura 7. Proceso de tinción. De izquierda a derecha: fijación con alcohol o metanol; inmersión en eosina amortiguada; inmersión en policromo amortiguado.

Finalmente, se enjuaga la laminilla con agua corriente (figura 8) y se seca al aire. Una vez terminado el proceso de tinción se observa al microscopio con aumento de 10X.

Figura 8. Enjuague de laminilla con agua corriente.

La interpretación se basa en la identificación y descripción de las células epiteliales; los anexos como moco, eritrocitos, neutrófilos y bacterias también son de utilidad para determinar la fase del ciclo estral.

18.2.2 FASES DEL CICLO ESTRAL

Las perras se consideran monoéstricas no estacionales y presentan de uno a dos ciclos por año. El ciclo estral se divide en cuatro fases: proestro, estro, diestro y anestro, cada una con características particulares en cuanto a comportamiento, signos, aspectos endocrinológicos y patrones celulares en la CVE (interactivo 1). El metaestro no se considera dentro de las fases debido a que es una etapa demasiado corta y la ovulación ocurre durante el estro.

Interactivo 1. Características de las células epiteliales vaginales y anexos que podemos observar en una CVE en las diferentes etapas del ciclo estral.
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Proestro. La duración del proestro es de 3 a 21 días. La estructura predominante en los ovarios son los folículos en crecimiento, los cuales incrementan la producción de estrógenos de niveles basales hasta alcanzar niveles máximos al final de esta etapa, mientras que la progesterona se mantiene en niveles basales (<1 ng/ml) durante esta fase.

Los estrógenos son responsables de la edematización de la vulva y de los cambios que ocurren en el epitelio vaginal, así como de la extravasación de eritrocitos al lumen uterino (y al resto del aparato reproductivo) provocando la salida de líquido serosanguinolento (figura 9). En la CVE se observan células parabasales, intermedias y eritrocitos como células predominantes.

Figura 9. Vulva edematizada sin presencia de líquido serosanguinolento.
Figura 9. Vulva edematizada con presencia de líquido serosanguinolento.

Estro. La duración del estro es de 3 a 21 días, la estructura predominante es el folículo de Graff. Al inicio de esta fase ocurre un pico preovulatorio de LH, el cual es el factor desencadenante para que dentro de las siguientes 48 a 72 horas tenga lugar la ovulación. La progesterona aumenta de 1 a 1.5 ng/ml hasta llegar al momento de la ovulación, donde los niveles van de 4-10 ng/ml. Conforme los niveles de progesterona aumentan, los niveles de estrógenos descienden (figura 10).

Figura 10. Representación de los niveles de progesterona durante el proestro (<1 ng/ml) y su incremento en el estro y la ovulación. Se observa el comportamiento de LH, el pico preovulatorio al inicio del estro.

La vulva se mantiene edematizada y con salida de líquido serosanguinolento, estos signos disminuyen conforme avanza esta etapa. En la CVE se observan de forma predominante células superficiales y anucleadas, aunque también pueden encontrarse eritrocitos.

Diestro. La duración del diestro es de 80 a 100 días en perras vacías, y de 63 ± 5 días en gestantes. El cuerpo lúteo es la estructura predominante, incrementa la concentración de progesterona hasta alcanzar niveles de 60-90 ng/ml. En hembras gestantes la progesterona desciende de manera gradual hasta 24 a 36 horas preparto, donde se registran niveles de 2 ng/ml. En el caso de hembras vacías el cuerpo lúteo sufre apoptosis.

La hembra no es receptiva al macho, no hay edema vulvar ni secreciones (figura 11). Las células predominantes en la CVE son intermedias, parabasales y es común la presencia de neutrófilos intracitoplasmáticos.

Figura 11. Vulva sin edematización.

Anestro. El anestro dura entre 4 a 10 meses. La estructura predominante es el cuerpo albicans, la FSH presenta pulsos esporádicos de 50-400 ng/ml que coinciden con los pulsos de LH. Al final del anestro, se producen secreciones pulsátiles de GnRH que estimulan la frecuencia de los pulsos de FSH y LH, provocando el reclutamiento de folículos para el proestro. Los niveles de estrógenos y progesterona se encuentran basales 2-10 pg/ml y menores a 1 ng/ml, respectivamente.

La hembra continúa sin receptividad al macho, la vulva tiene “apariencia pequeña” y sin secreciones. No se encuentra ningún tipo celular predominante y se observan estrías de moco en cantidad abundante al realizar la CVE.

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